ATP生物熒光檢測是基于螢火蟲發光原理設計的，螢火蟲在夜晚可以發出熒光，其反應原理是在蟲熒光素酶催化下，熒光素與ATP生成氧化熒光素并且放出熒光。此反應必須有ATP的參與且其發光強度與ATP的濃度呈正相關。ATP廣泛存在于所有動植物、細菌、霉菌、酵母菌等活細胞中，為生命活動提供能量，其含量在正常細胞的一生中相當的穩定，故檢測ATP含量可反應醫療器械表面所有的生物負載，從而直接反應器械的潔凈程度。